Возможно, вы сменили регион при заполнении корзины.
Часть товаров из корзины будет перемещена в статус отложенных
и не сможет быть оформлена для заказа, если вы продолжите работу в данном регионе
Новый набор для эффективной экстракции бактериального белка, НЭББ, diaGene
23.03.2021
Лизис клеток является важным этапом экстракции и дальнейшей очистки внутриклеточных белков. Метод, используемый для лизиса клеточной стенки, может в значительной степени влиять на успешность и воспроизводимость последующих приложений. Исследуемый белок может теряться на каждом этапе экстракции и очистки, поэтому необходимо выбрать наиболее оптимальный метод разрушения клеточной стенки, позволяющий получить максимально возможный выход и чистоту белка.
Новый набор для экстракции бактериального белка, НЭББ, diaGene выделяет белки не денатурируя их, не содержит детергенты и компоненты, мешающие последующим применениям. НЭББ более эффективен, чем традиционная обработка ультразвуком и приготовленные в лаборатории буферы для лизиса, при этом он гораздо дешевле, чем существующие аналоги.
НЭББ это готовый к использованию реагент для лизиса клеток, представляющий собой раствор на основе неионогенных детергентов, которые эффективно разрушают клетки и солюбилизируют нативные или рекомбинантные белки без денатурации. Детергент входящий в состав НЭББ создает отверстия в клеточной мембране, освобождая цитозольные белки и бактериальную хромосому. После высвобождения хромосомы, раствор может стать вязким, что затрудняет последующую очистку бактериального белка. В этом случае рекомендуется добавить бензонуклеазу
к реакционной смеси для снижения вязкости раствора. Для лучшей эффективности лизиса и при наличии телец включения рекомендуем добавить лизоцим
к реакционной смеси.
Все реагенты НЭББ совместимы с последующими приложениями, такими как ионообменная и аффинная хроматография (например, аффинная хроматография с иммобилизованным металлом, хроматография с глутатионом), SDS-электрофорез, количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда. В зависимости от конкретного применения, к реагенту могут быть добавлены ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты, денатурирующие агенты и хелатирующие агенты кроме ЭДТА.
Особенности набора для экстракции бактериального белка, НЭББ:
Готов к использованию — одностадийный лизис клеток грамотрицательных бактерий с использованием мягкого неионогенного детергента в составе буфера.
Удобен в использовании — добавьте реагент в бактериальный осадок, инкубируйте при перемешивании в течение 10–15 минут и извлеките растворимые белки после осаждения остатков клеток.
Обеспечивает высокий выход рекомбинантных белков из бактериальных лизатов или очистку телец включения до почти гомогенного состояния.
Подходит для любого масштаба экстракции белка и доступен в нескольких форматах.
Набор для экстракции бактериального белка, НЭББ — готовый к использованию реагент для лизиса клеток, представляющий собой раствор на основе неионогенных детергентов, которые эффективно разрушают клетки и солюбилизируют нативные или рекомбинантные белки без денатурации. Все реагенты НЭББ совместимы с последующими приложениями, такими как ионообменная и аффинная хроматография (например, аффинная хроматография с иммобилизованным металлом, хроматография с глутатионом), SDS-электрофорез, количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда. В зависимости от конкретного применения, к реагенту могут быть добавлены ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты, денатурирующие агенты и хелатирующие агенты кроме ЭДТА.
НЭББ более эффективен, чем традиционная обработка ультразвуком и приготовленные в лаборатории буферы для лизиса, многие, из которых содержат детергенты и компоненты, которые мешают последующим применениям.
Готов к использованию — одностадийный лизис клеток грамотрицательных бактерий с использованием мягкого неионогенного детергента в составе буфера.
Удобен в использовании — добавьте реагент в бактериальный осадок, инкубируйте при перемешивании в течение 10–15 минут и извлеките растворимые белки после осаждения остатков клеток.
Обеспечивает высокий выход рекомбинантных белков из бактериальных лизатов или очистку телец включения до почти гомогенного состояния.
Подходит для любого масштаба экстракции белка и доступен в нескольких форматах.
Совместим с добавлением ингибиторов протеаз.
Наборы для экстракции бактериального белка:
123456.0010 НЭББ-10 (на 10 г биомассы бактерий):
20хНЭББ-буфер 50 мл;
лизоцим, 0,2 мл, 50 мг/мл;
бензонуклеаза, 0,2 мл, 10000 ед/мл.
123456.0025 НЭББ-25 (на 25 г биомассы бактерий):
20хНЭББ-буфер 100 мл;
лизоцим, 0,5 мл, 50 мг/мл;
бензонуклеаза, 0,5 мл, 10000 ед/мл.
123456.0100 НЭББ-100 (на 100 г биомассы бактерий);
20хНЭББ-буфер 500 мл;
лизоцим, 4×0,5 мл, 50 мг/мл;
бензонуклеаза, 4×0,5 мл, 10000 ед/мл;
Условия хранения:
20хбуфер — при комнатной температуре или при +4 °С.
Лизоцим и бензонуклеаза при -20 °С.
Набор для экстракции бактериального белка B-PER обеспечивает мягкую экстракцию белков из бактерий (E. coli) без необходимости механического повреждения клеток. Набор может быть использован для выделения растворенных белков и телец включения из бактериальных клеточных лизатов. В состав набора входит реагент для экстракции бактериального белка B-PER, лизоцим и ДНКаза I, что позволяет выделять белки большого молекулярного веса (более 70 кДа) и белки экспрессирующиеся в тельцах включения. В зависимости от применения, добавочные компоненты: ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты могут быть добавлены к реагенту.
Важная информация о продукте:
B-PER экстрагирует белки из свежих и замороженных клеток. Обычно экстракция более эффективна из замороженных клеток. Количество реагента зависит от количества клеточной пасты. Если необходимо, добавьте ингибиторы протеаз не содержащие ЭДТА, соли, и восстанавливающие агенты прямо в реагент.
добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER реагенту для более эффективной экстракции белка. Экстракция некоторых сверхэкспрессированных белков не требует добавления лизоцима;
если добавление лизоцима и ДНКазы I может помешать последующему применению, использование этих ферментов следует исключить;
реагент B-PER эффективно экстрагирует растворимые белки из распространенных бактериальных штаммов и особенно подходит для штаммов BL21 с дефектной протеазной экспрессией. Если лизис клеток проходит неэффективно для определенного бактериального штамма, заморозьте клетки перед экстракцией;
лизаты цельных клеток, приготовленные с помощью реагента B-PER, совместимы с последующими приложениями, такими как количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда.
Протокол экстракции белка из бактериальных клеток:
осадите бактериальные клетки центрифугированием при 5000 g в течении 10 минут;
если необходимо, добавьте 2 мкл лизоцима и 2 мкл ДНКазы I на 1 мл реагента B-PER. Добавьте ингибитор протеаз не содержащий ЭДТА;
добавьте 4 мл реагента B-PER на каждый грамм осадка клеток. Суспендируйте пипетированием;
инкубируйте 10-15 минут при комнатной температуре;
центрифугируйте лизат при 15000 g в течении 5 минут для отделения растворимых и нерастворимых белков.
Примечание: Если огромное количество сверхэкспрессированного белка остается в осадке, выделяемый белок может экспрессироваться в тельцах включения. В этом случае, либо используйте реагент для очистки телец включений (арт. 78115), либо измените условия экспрессии белка для минимизации образования телец включения.
Проблемы при выделении, причины и решения:
Проблема
Возможная причина
Решение
Выделяемый белок не растворяется
Выделяемый белок экспрессируется в тельцах включения
Измените условия экспрессии белка или используйте реагент для солюбилизации телец включения.
Добавьте лизоцим и ДНКазу I к реагенту B-PER
Бактериальные клетки не лизируются при добавлении фермента
Температура слишком низкая
Подогрейте клеточную культуру и остальные реагенты до комнатной температуры
Лизоцим имеет низкую активность или неактивен
Добавьте больше лизоцима к B-PER
реагенту или купите новый фермент.
Высокая вязкость клеточного экстракта
ДНКаза I имеет низкую активность или неактивна
Добавьте больше ДНКазы I к B-PER
реагенту или купите новый фермент.
Добавьте Mg2+ до конечной концентрации 2 mM
Сверхэкспрессированный белок остается в осадке
Только реагент B-PER не может перевести белок в растворенное состояние
Добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER
Реагент B-PER
мутный после доставки
Реагент холодный
Нагрейте реагент до комнатной температуры
Состав набора B-PER:
B-PER реагент для экстракции бактериального белка, 250 мл;
лизоцим, 0.5 мл 50мг/мл;
ДНКаза I, 0.5 мл, 2500 ед/мл.
Сопутствующие товары Thermo Scientific:
78990 Реагент для экстракции белка из дрожжей Y-PER, Thermo FS;
89802 Реагент для экстракции белка из клеток насекомых I-PER, Thermo FS;
78505 Реагент для экстракции белка из культивируемых клеток млекопитающих M-PER, Thermo FS;
78510 Реагент для экстракции белка из тканей T-PER, Thermo FS;
A44056 Реагент для экстракции суммарного белка из растений Pierce Plant, Thermo FS;
89802 Реагент для экстракции белка из насекомых I-PER, Thermo FS;
78115 Реагент для очистки телец включений, Thermo FS.
Информацию о данной продукции можно получить по запросу.
См. также:
Бензонуклеаза
– фермент гидролизующий все примеси нуклеиновых кислот
Теперь с помощью мобильного телефона легко искать интересующее Вас оборудование,
реактивы и расходные материалы, проверять наличие на складе, сделать заказ
и отслеживать его выполнение!
Подпишитесь на канал Telegram Диаэм
Будьте в курсе последних новостей науки, технологий и интересных предложений!
Актуальные новости из мира Life sciences, биотехнологий и аналитической химии
стали еще доступнее.
Регистрация на сайте компании Диаэм доступна только для юридических лиц, для физических лиц сделать заказ и узнать его статус можно без регистрации или обратившись в компанию по телефону +7 495-745-0508 или электронной почте info@dia-m.ru
Для повышения удобства работы с сайтом на нем используются файлы cookie.
В cookie содержатся данные о Ваших прошлых посещениях сайта. Если Вы не хотите, чтобы эти данные
обрабатывались, отключите cookie в настройках браузера.
Лизис клеток является важным этапом экстракции и дальнейшей очистки внутриклеточных белков. Метод, используемый для лизиса клеточной стенки, может в значительной степени влиять на успешность и воспроизводимость последующих приложений. Исследуемый белок может теряться на каждом этапе экстракции и очистки, поэтому необходимо выбрать наиболее оптимальный метод разрушения клеточной стенки, позволяющий получить максимально возможный выход и чистоту белка. 
Все реагенты НЭББ совместимы с последующими приложениями, такими как ионообменная и аффинная хроматография (например, аффинная хроматография с иммобилизованным металлом, хроматография с глутатионом), SDS-электрофорез, количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда. В зависимости от конкретного применения, к реагенту могут быть добавлены ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты, денатурирующие агенты и хелатирующие агенты кроме ЭДТА. 
